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厦门大学
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一种检测靶核酸序列的方法

2022-07-28 14:18:02
云上高博会 https://heec.cahe.edu.cn
所属领域:
生物、医药及医疗机械
项目成果/简介:

一、项目分类

关键核心技术突破

二、技术分析

(1)本技术能够在仅使用一种标记探针(即,检测探针)的情况下,实现对多种靶核酸序列的同时检测(多重检测)。

(2)本技术能够实现对多种靶核酸序列的同时检测(多重检测),并且能够同时检测靶核酸序列的最大数目远远超出了所使用的标记探针(即,检测探针)的数目。

因此,本技术提供了一种简单、高效、低成本的多重检测法。本技术能够检测的靶核酸序列的最大数目不受限于所使用的标记探针(即,检测探针)的数目;能够基于相对有限数目的标记探针(即,检测探针)实现对显著更多数量的靶核酸序列的同时检测(多重检测),这是特别有利的。

对比国内外同类技术,本技术的优势包括:①标记过程极为方便且成本低。假设同样需要识别15种高危型HPV,已商品化的实时PCR检测试剂盒、已报道的多管实时PCR检测体系、包括实时PCR熔解曲线技术均需要15条荧光探针进行检测。而本技术只需要4条荧光探针就可以完成15种高危型HPV的识别。②熔点温度不会受待检DNA序列的多态性位点或二级结构的影响。传统实时PCR技术和熔解曲线分析技术的检测结果经常会受到荧光探针覆盖区的SNP或二级结构的干扰。而本技术中荧光探针只与标签序列杂交,因此检测获得的熔点温度可以保持恒定。③具备优秀的兼容能力,一个熔点标签库可以适用于不同领域多个对象的检测,而且针对不同的检测对象可以采用相同的检测流程,试剂组份只需要更换杂交探针,设计上只需改动杂交探针的特异杂交序列。这种体系兼容能力大幅度缩短了新体系的研发时间。④判读统一规范,易于在临床应用中推广。目前大部分检测技术针对不同的检测对象需要建立不同的判读标准。而本技术则可以像条形码一样标记不同的检测对象,因此较容易实现自动化判读。

应用范围:

本项目运用杂交连接技术和多色熔解分析技术相结合,将核酸“熔点”这一物理性质转化为一种虚拟标记物,与荧光物质结合,实现荧光和熔点组合作为标签进行靶核酸的检测,发展出通用的多靶标核酸分析技术,使均相检测模式的检测容量在实时PCR基础上实现了一个数量级以上的提高。本技术是目前实时PCR多重检测领域能够一次单管检测靶标数目最多的技术,大大拓宽了其应用范围,弥补了对于多重核酸检测,特别是在单荧光通道检测中,实时荧光PCR便难以区分多靶标检测结果的不足,在某些应用领域较二代测序方法,更快速且成本降低。

效益分析:

利用本技术,已实现了对48个SNPs的基因分型,30种HPV的分型,40余种肠道微生物的检测。其中48个SNPs分型检测试剂已用于法医个体识别,并与河南省公安厅和江西省公安厅合作,联合开展犯罪分子和拐卖儿童的甄别工作。此外,我们联合厦门大学附属中山医院、厦门大学附属翔安医院,将该系统结合数字PCR检测,用于骨髓移植嵌合体追踪,肝移植、肾移植等器官移植排斥的监测,取得了良好的效果并考虑将其发展为骨髓移植嵌合体检测、实体器官移植排斥监测新规范的可能性。研发中的30种HPV的分型检测体系,是迄今操作最为简便、分型数目最多的均相分型系统,目前正开展大样本评价。40余种肠道微生物的检测研究则获国家自然科学基金支持,进行肠道传染病病原体的快速饰查,该项目的研究目标是一次性检测引起腹泻的多种微生物,包括30余种细菌、数种病毒和寄生虫,达到迅速排查的目的。

知识产权类型:
发明专利
知识产权编号:
Zl 201710299957.4
技术成熟度:
通过中试
技术先进程度:
达到国际领先水平
成果获得方式:
独立研究
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